鸡大肝脾病的研究进展

顾名思义，鸡大肝脾病 ( Big liver and spleen disease , BLS ) 就是以肝脏肿大和脾脏肿大为特徵的一种传染病，1980 年首次发生於澳大利亚，Rarni 氏对本病做了详细的描述；於 1984 年 Curtin 氏建立的诊断该病的免病琼脂扩散法 ( immune agar diffusion test )，在澳大利亚等国已得到广泛应用。鉴於在该国的东南部新南威尔士州 ( New South Wales ) 屡屡发生，因此 Handlinger 和 Williams 於 1988 年又再一次追述了本病，以引起各国学者的注意。鸡大肝脾病的病原学虽然最後尚未确定，但英国、美国、纽西兰等国家，已经通过血清学的调查证实一些鸡群感染过此病。在中国大陆，鸡肝脾病於 1995 年徐福南等就有所报告，并於 1996 ~ 1997 年谭勋等、单松华等、杨德吉等还做了流行病学初步调查和血清学调查，都认为鸡大肝脾病感染在国内存在，而且感染的范围较大。本病固然可以传染广大鸡群，但最主要的还是感染“肉用品种”的种母鸡，特别是艾维茵 ( Avian ) 和 AA 品种等。鸡患病後精神萎顿，不思饮食，产蛋量急骤下降，死亡率增高。下面就鸡大肝脾病的病原、流行病学、病理变化、临床症状、诊断要领和防治对策等，特别是近年研究进展方面的，简单的做一文献综述。

既然是病原学未加确定，我们不妨称其为“鸡大肝脾病因子”( Big liver and spleen disease factor , BLSF )。将病材经过 0.22 微米 ( um ) 之滤膜 ( filler membrane ) 滤过後，接种鸡时会发生鸡大肝脾病；而且 BLSF 与任何已知的家禽病原没有血清学交叉反应 ( cross-reacting )，因而被认为是一种传染性病毒疾病。

Avery 氏曾於 1988 年用电子显微镜检查肝组织和组织培养物时，发现了一株细胞培养因子，当时他把这种病原体称作“显披膜病毒”( togavirus like )，并且对有机溶剂 ( organic solvent ) 十分敏感，因而推测是一种有囊膜的病毒。Curtin 氏在一篇实验报告中说，用鸡胚肝细胞 ( chick embryo hepatocyte ) 则能分离到一株可产生“细胞病理效应”( cytopathic effect ) 的鸡大肝脾病因子。McFerran 等又於 1993 年报导称，用鸡大肝脾病的病材经过离心後，再接种鸡胚肾细胞 ( chick embryo renal cells )，能从中分离到一株有囊膜的核糖核酸病毒 ( ribonucleic acid virus , RNA virus )。但是，这些因子 ( 无论哪一个 ) 回归动物都没有获得成功。

与此同时，还试行了其它种种实验研究，诸如曾用肝、脾材料尿囊腔 ( allantoic cavity ) 接种鸡胚 ( 连续十代 )、火鸡胚 ( 四代 )、鸭胚 ( 七代 )，卵黄囊 ( vitelline sac＝yolk sac ) 和绒毛尿囊膜 ( chorioallantoic membrane ) 接种鸡胚 ( 连续八代 ) 等，企图分离病毒都没有获得成功；还用电子显微镜或免疫电子显微镜，检查肝、脾、粪便、组织培养上清液 ( supernatant fluid )、超薄切片 ( ultrathin section ) 及琼脂扩散试验沉淀线等，也没有找出确切之病毒。

感染鸡大肝脾病因子的鸡只，其肝、脾以及血清中，可以用琼脂扩散试验很容易找到抗原 ( antigen )。此抗原是一种低分子量物质，为一硷性蛋白质 ( alkaline protein )；分子量大约是 10 ~ 20 kD ( kilodalton )，在琼脂扩散试验中可以凝集成分子量为 45 kD 的凝集物。在大规模鸡大肝脾病爆发当中，未见有抗原变异 ( antigen variation ) 的血清学证据；但在标准化肉用鸡群的饲养条件下，把这些鸡给予鸡大肝脾病因子感染，其“疾病严重种度”的不一致现象，可能反映了各“株”之间不同的差异性。

在体外培养鸡大肝脾病因子也没有成功，例如曾用已知的“病材”，接种鸡胚成纤维细胞 ( chick embryo fibroblast )、鸡胚肝细胞 ( chick embyo hepatic cell )、鸡胚肾细胞 ( chick embryo renal cell )、鸡骨髓细胞 ( chick marrow cell )、鸭胚成纤维细胞 ( duck embryo fibroblast )、猴肾细胞 ( monkey kidney cell ) 等禽类和哺乳动物的细胞，均不能引起“细胞病理效应”( 上述 Curtin 氏的实验报告例外 )。

用标准鸡大肝脾病抗体和抗原，与马立克氏病 ( Marek's disease )、传染性法氏囊病 ( infectious bursal disease ) 或鸡腺病毒 ( adenovirus ) 的抗原和抗体做免疫琼脂扩散试验时，均无沉淀线出现，说明免疫琼脂扩散试验法对鸡大肝脾病具有一定的特异性。

至於鸡大肝脾病因子的复制 ( duplication ) 部位或方式尚无直接的证据，不过 Clarke 氏等用萤光素标记 ( fluorescein label ) 家兔或鸡大肝脾病的抗血清时，可以检测到肝、脾切片胞浆口的鸡大肝脾病 A 抗原 ( A antigen )，但这个 A 抗原与病毒复制之间的关系尚不清楚。家兔或鸡只的肝、脾其吞噬细胞 ( phagocyte ) 的胞浆当中，所出现的鸡大肝脾病抗原，暗示病毒的复制可能在吞噬细胞之外。

许多实验研究证实，鸡大肝脾病是“接触性传染”，鸡大肝脾病因子存在於病鸡的血液、肝、脾、肾等组织中；有关“自然传播”之途径不甚清楚，不过在有些地区其肉用鸡也可自然发生，如在澳大利亚经常於夏、秋季盛行，这可能与媒介昆有关。

鸡大肝脾病在澳大利亚的许多州呈散发流行；但在新南威尔士州的一些地区，可能存在着地方性流行或 ( 不经常的 ) 爆发性流行。鸡大肝脾病因子的传播可发生於任何年龄，在一个六仟至八仟羽种鸡的鸡舍内，其因子在一周内可传播到大多数鸡只，二至三周後大多数鸡只可出现血清阳性抗体；但在不同的鸡舍之间，其传播要慢许多。

在中国大陆也做了许多的调查研究，实验报告不少。例如，杨德吉等 ( 1997 年 ) 对安微、江苏、山东三个省的四个鸡场艾维茵种母鸡进行了血清学调查，他们将“血清样品”和“肝脾病材”都按照不同的周龄分为四个组，以比较各个组间差异性 ( 详见表一及表二 )。根据结果作者认为，不同周龄的鸡只，无论是血清中的抗体还是肝、脾中抗原，其检出率都各有不同，有随着周龄增大而增加的趋势。其一，可以说明该病具有传染性，随日龄的增加而蔓延；其二，表明这种蔓延速度并不快，鸡大肝脾病可能属於一种相对慢性的感染。

周龄

样品数

阳性数

可疑数

阳性率

36.7%

27.7%

6.0%

周龄

样品数

阳性数

可疑数

阳性率

46.7%

33.3%

17.5%

注：表一及表二皆於 37℃ 24小时後观察结果，随後进行一次重复琼扩试验，

两次结果均为阳性者判定阳性；一次为阳性一次为阴性者判定为可疑；两次均为

据部分资料提示，母鸡产蛋的“卵黄”中，也有大约四分之一左右的鸡大肝脾病抗体检出率，说明幼雏可获得较高水平的母源性抗体而可抵御感染。典型的鸡大肝脾病可以“垂直传播”( 上一代传染给下一代 )，多发生在三周龄左右的子代，比“种鸡群”出现的抗体要早一些；随着种鸡群阳性抗体的出现，垂直传播从而终止并不再发生。

除年龄之外，影响鸡大肝脾病因子感染的表现仍有许多因素，这些因素主要是：性别，品种，生理状况，体质差别，以及“紧迫”等等。一般多发生於 35 ~ 50 周龄的成年鸡，肉用种鸡比白来亨鸡 ( Leghorn ) 更容易发生感染，雄性鸡比雌性鸡表现出更轻的症状，并且阳性抗体出现的时间要稍微晚一些。紧迫 ( stress ) 状况或协同感染，後者如霉浆菌 ( Mycoplasma ) 感染、鸡霍乱 ( chicken-cholera )、鸡传染性鼻炎 ( infectious coryza ) 等，都会促使疾病的发生。

到现在为止，鸡大肝脾病只能感染家鸡，其它禽类未必都能成为“自然宿主”。有许多证据表明，珍珠鸡 ( guinea fowl )、鸭及其它水禽、鹦鹉、乌鸭、麻雀等等，根据血清学的种种研究，都没发现鸡大肝脾病因子 A 抗原的阳性抗体。至於火鸡 ( turkey )，也只是在鸡大肝脾病的鸡肝病材接种“幼火鸡”後，於 2 ~ 3 周之内琼脂扩散试验法可检测到抗体，其它一律成年火鸡或幼火鸡也不是鸡大肝脾病因子感染对象。

鸡只患了鸡大肝脾病之後，一般情况可以分为“肉眼观察”和／或“组织学变化”；即使是肉眼观察 ( 特别是在疾病流行的过程当中 )，也足可证实鸡只是患了这种病。

1.良好的体况：病鸡或死亡的鸡只中，体况往往是良好的，嗉囊常空虚，内脏和皮下脂肪呈黄疸色，肝脏和脾脏常行肿大 ( 特别是脾脏 )，呈“斑驳”状 ( 一种颜色中掺有别种颜色，处於花花搭搭的模样 )。

2.脾脏的重量：脾脏的“正常”重量为 2 ~ 3 克，脾与体重之比 0.5 ~ 0.8 克／公斤；而鸡大肝脾病时，常为脾脏正常大小的 2 ~ 3 倍，重量往往达到 4 ~ 10 克或更多，脾与体重之比亦常达 1.1 ~ 3.0 克／公斤。

3.脾脏的切面：在脾的切面显示有：红髓 ( red pulp ) 中分布着大量小的白色病灶；然而在疾病後期，切面可见大的粉红色病灶，常呈苍白色，有些鸡只的脾脏之重量可达 22 克以上。

4.卵巢的改变：卵巢往往退化，在大的苍白色松弛的滤泡中常常出现血块，在腹腔当中有时有游离卵黄的腹膜炎 ( peritonitis )；特别是病程後期，卵巢及输卵管完全退化，或有数个浓缩的异常卵子附在不活跃的卵巢上。

5.内脏的出血：在十二指肠黏膜表面上，可见出血点；严重充血和水肿的肺脏和肾脏上，有时亦可见有瘀斑状出血。

最具特徵的肝脏和脾脏组织病理学的变化，大致上可以分为以下六个阶段。

1.淋巴增殖期：早在症状出现前两周左右，脾脏轻微肿大 ( 1.1 ~ 1.7 克／公斤 ) 时全身淋巴细胞即增生，肝及脾尤为明显；脾表现为周边椭圆体“成淋巴细胞”(lymphocytoblast ) 区增大，和动脉周围“小淋巴细胞”( small lymphocyte ) 的增多，但滤泡 ( foilliculus ) 数目增加不明显；肝脏亦表现为淋巴样组织 ( lymphoid tissue ) 明显增多。

2.固缩 ( pyknosis ) 破坏期：此时山现临床症状，淋巴样组织内发生细胞核固缩 ( karyophknosis )，最初在脾滤泡和小动脉周围的小淋巴细胞发生，以後扩展至脾白髓 ( White pulp ) 的所有区域，甚或红髓 ( red pulp )；肝脏的血管周围亦可见到核固缩。

3.巨噬细胞反应期：固缩破坏期後随即进入巨噬细胞 ( macrophagocyte ) 反应期，有的时候亦可为多形核白血球 ( polymorphonuclear lekocyte ) 反应，受侵害的部位出现不少的碎片和死亡的吞噬细胞；在淋巴样细胞间有嗜曙红的 ( eosinophilic ) 巨噬细胞碎片及融合成片的坏死组织。

4.病後反应期：此时间内核固缩固然很少见到，但脾脏的巨噬细胞反应仍很明显，肿大的脾出现大量的大的网状内皮细胞 ( reticuloendothelial cell ) 区、不同程度的纤维变性 ( fibrosis )、残存的坏死及不定形的病灶。

5.血液学之变化：血液学基本上反映了脾脏变化的特点，淋巴增殖期出现淋巴球增多；核固缩破坏期出现红血球的固缩，而白血球则少见；巨噬细胞反应期和病後反应期有不同的核左移 ( shift to left )，有时出现大量的单核细胞增多症 ( mononucleosis，不超过 75% )；如果疾病早期出现巨大的反应性血小板 ( reactive thrombocytes )，则疾病後期必然表现为贫血。

6.疾病恢复期：免於死亡的鸡只，常常在临床症状出现之後，大约经过三到四周进入恢复期，此时脾脏大小基本恢复正常；在组织病理学上，除周边椭圆体 ( ellipsoid ) 成淋巴细胞区有不同程度增大外，偶尔亦有残存的小坏死灶、不同程度的纤维变性、以及肝的胆管增生等；脾脏在一段时间内虽然还维持衰竭状态，但仍有淋巴细胞的生成等。

鸡大肝脾病一般来说是一种慢性感染，潜伏期常需数月。性成熟前任何龄的母鸡均可感染，但不发病。在肝脏、脾脏或血清中，鸡大肝脾病抗原可能至少持续六周。因此，不论鸡群是在一日龄或其後的任何时间感染，也不论是否存在鸡大肝脾病循环 A 抗原或琼脂扩散阳性抗体，往往在性成熟後的数周内发病。

在一个高度易感性的鸡群里，疾病在一至两周内很快扩展至全群，鸡群出现突然而又迅速产蛋量下降，这一时间要持续三至四周，随後再经过几个星期 ( 一般为三周左右 ) 又恢复到接近正常的水平 ( 在疾病後期常常可以见到“小鸡蛋”，这项示着鸡群产蛋量的水平即将宣告结束 )。若在“产蛋早期”发生鸡大肝脾病。则鸡群的产蛋高峰往往不够明显。母鸡每天产蛋量的下降，一般来说其幅度大约在 5 ~ 20%。

在产蛋量下降明显的同时，感染鸡大肝脾病的商业性种鸡群中，开始出现血清抗体由阴性转为阳性；一般在最初产蛋量下降的两到四周内，鸡群中 70 ~ 100% 个体出现抗体。在爆发性的鸡大肝脾病时，一般於组织学变化出现三周後，肉用种鸡可以检测到抗体。当用鸡大肝脾病的脾脏、肝脏或血沉棕黄层 ( buffy coat ) 静脉内接种产蛋的肉用种鸡时，20% 左右个体在接种 13 天後出现抗体，20 天後 90 ~ 100% 出现抗体；接种後第十五天左右可从鸡的肝、脾组织中检测到鸡大肝脾病抗原，20 天前後可以从 70% 个体检测到抗原；与它们养在一起的鸡群，则要较迟一些出现血清阳性抗体，接种 30 天後只有 20% 个体出现阳转、40 天後全鸡群出现阳转。这一点经营商业用肉用种鸡群的人不可不知。

临床和试验资料表明，成年的肉用产蛋鸡感染鸡大肝脾病後，对本病“再感染”产生免疫力，一般说来是永久的，而且大多数鸡群琼脂扩散试验阳性。虽然鸡大肝脾病对“孵化率”有暂时性影响，但没有明显的蛋壳畸形。在一些鸡群中可见到鸡只死亡率增加，随着最初产蛋量的下降死亡开始升高，至产蛋量下降到最低水平时即达最大限度，然後逐渐恢复到正常。死亡率变化幅度较大，平均起来大致为 1%。

鸡大肝脾病多在夏、秋季多发，以产蛋的肉用种鸡最易感染，根据肝脏和脾脏肿大等特徵 ( 呈斑驳状 ) 并结合着流行病学之特点，初步诊断并不困难；但是，需要进一步些“确诊”( 特别是第一例 ) 那就不得不靠实验室的协助。

用免疫琼脂扩散试验法来检测抗体，一直被成功地用於商业性鸡群的鸡大肝脾病；在常规监测的计划中，一般每隔四周抽检一个鸡群的 10 ~ 20 份血样就可以了。琼脂扩散试验法虽然简便易行，但有时亦可出现“假阳性”反应；纠正的方法是多做几次试验，并以正常肝组织抗原作为对照。又据 Payne 等报告称，他已研究出“鶤联免疫吸附测定法”( Enzymelinked immunosorbent assay )，用此法亦能克服假阳性，不过与琼脂扩散试验法比起来稍微费事些。( Payne , C.J. et al : ELISA testing of U.S.breeders and layers for big liver and spleen disease. In : Proceedings 40th Western Poultry Disease. Conference. Acapulco. 1991. )

鸡大肝脾病的抗原常存在於脾、肝和血清中，可用琼脂扩散试验或鶤免疫测定加以检测，亦可用免疫萤光试验 ( Immunofluorescence test ) 来检测组织切片、涂片和细胞培养物中的抗原，从而对鸡大肝脾病感染作出诊断。病原的分离依赖於动物接种，在疾病的急性期采集感染鸡的脾、肝或血沉中的“棕黄层”，接种易感鸡胚或一日龄雏鸡，在七日龄时便可在其血清或组织中检测到鸡大肝脾病 A 抗原。倘若接种到易感的成年鸡，不仅可以引起产蛋量下降，血清中可检测到鸡大肝脾病的阳性抗体，而且在剖检时脾脏肿大，组织中更可检测到 A 抗原等。

产蛋量下降是一个养鸡业最常遇到的问题，一些传染病如减蛋症候群 ( Egg drop syndrome，亦称产蛋下降症候群 )、传染性支气管炎 ( Infectious bronchitis )、传染性喉气管炎 ( Infectious laryngotracheitis )、新城疫 ( Newcastle disease )、环境紧迫 ( Environmental stress )、饲养管理等因素均可引起。倘若一个鸡群出现产蛋量下降，且伴随着鸡大肝脾病抗体出现，剖检肝脏或脾脏肿大并呈斑驳状，具有典型的组织学变化，则可确诊为鸡大肝脾病。

尽管鸡大肝脾病因子的自然宿主及传播方式还不十分清楚，但首先是进行严格的隔离、严格杜绝传染源的侵入、依靠严格的检疫，乃是最重要的问题。鸡场采购鸡只时，从抗体阴性的种鸡群引种，并定期进行监测；最好是采用“全进全出”的办法，一旦鸡只出售後，一定要进行严格的消毒。

鸡大肝脾病尚无疫苗和特效疗法。曾用感染组织制成灭活油乳剂疫苗，进行肉用种鸡的实验，结果用琼脂扩散试验法并没有检测到抗体。使用某些抗生素，在控制鸡只的死亡率有一定的作用，但主要是为了防止继发性细菌感染，对病毒却没有什麽用途。

大量的事实证明，如果增加额外的饲料，将会有助於鸡大肝脾病的鸡群恢复产蛋水平。良好的卫生措施，有助於防止鸡大肝脾病的扩散。本病的发病季节或许与媒介昆有关，因此消灭有害昆也是很重要的一个环节。在某些鸡场，经过采取严格的检疫措施和有效的卫生环境，已成功地消灭了鸡大肝脾病。

鸡大肝脾病的病原虽尚未查清，但基本上是由一种病毒引起的。由澳大利亚开始，目前已有许多国家 ( 如美国、英国、纽西兰等 ) 都报告了这疾病，而且中国大陆业已查到本病的阳性抗体。鸡大肝脾病的病理变化，主要为脾脏和肝脏肿大，并呈斑驳状；加之产蛋量有明显下降和一定的死亡率。鸡大肝脾病没有合适疫苗，亦无特殊的治疗方法，只有依靠严格的检疫措施、严格杜绝传染源、或发病後进行严格的隔离，以使之鸡大肝脾病无法发生或少发生。