猪胸膜肺炎菌株之研究和认识

高清泽

一、摘　要

　　放线杆菌属胸膜肺炎菌血清型第 5 型菌株之长链脂性多糖类 ( LC LPS ) 已被评估和比较这在酵素结合免疫学吸附作用测定法 ( ELISA ) 中这自然煮沸抽出物 ( CBE ) 之血清学诊断这猪胸膜肺炎之本菌型引起原因。结果 ELISA 法测定 LC LPS 之平均光学密度 ( OD )，其未患病猪之血清也如同人工或自然感染这放线杆菌属胸膜肺炎菌 ( APP ) 血清型第 5 型菌株，在其自够煮沸抽出物均是相同结果。

　　然而，猪只感染 APP 之血清型菌株比较这 APP 之血清型第 5 型血清，前者出现较低光学密度平均值，此乃在 ELISA 测定法使用这 LC CPS 时表现之。随後结果，它被证明可消除这非特异性交叉反应之占很高百分比情形，但它没有失去其特异性。使用二种不同割取值 ( 指光学密度值加上 2 ~ 3 个标准误差值 ) 评估这 LC LPC ( 长链脂性多糖类 ) 和 CBE ( 自然煮沸抽出物 ) 在这 ELISA ( 酵素结合免疫学吸附作用测定法 ) 评估其特异性和敏感性作用，即是本研究主旨。

　　本研究取得未患本病 ( APP ) 养猪场 593 个血清样品，这 LC LPS 出现较多合适抗原，此乃比较这 CBE 出现抗原而言，因此在敏感性和特异性可达 97%效率。

　　然而，它也许是合理的保持一个缓冲范围，其光学密度介於 0.194 ~ 0.243 之间，和认为血清出现值在这范围内，当做可疑阳性反应。在本文研究中，这补体结合测定法出现很高特异性 ( 97% ) 和很低敏感性 ( 47% ) 之反应。在一个养猪场猪只血清样品使用 ELISA 测定法呈现阳性反应和 CFT ( 补体结合作用测定法 ) 呈现阴性反应，由此追查解剖若没有肺部病灶，则将不认为这养猪场为非感染本病 ( APP ) 之猪群。

二、序　言

　　猪胸膜肺炎是在大型规模养猪场占一种很重要的健康性问题，它引起严重性经济性损失。通常在慢性感染猪放线杆菌属胸膜肺炎菌未被注意之，因此带菌猪之确认是占很重要的工作。另外从慢性感染本病 ( APP ) 猪只取得病材分离这病原体 ( 细菌 ) 通常也是很困难之工作。因此使用血清学诊断鉴定法 ( ELISA 和 CFT ) 可区别猪只感染或未感染本菌株猪只。

　　在感染猪只使用广泛性各种血清学测定法已发展可发现抗体去对抗本菌株 ( APP ) 作用。在许多实验室中，这补体结合作用测定法仍然可供诊断本病之方法。然而在许多实验室也发现，这补体结合作用测定法在例行诊断法中，它是很难操作完成诊断法，因为它是一种很麻烦和耗用时间之诊断技术方法。

　　另外，许多猪血清之补体结合作用之抗体；它是经常测定不出来，因此最近几年以来已发展这 ELISA ( 酵素结合免疫学吸附作用测定法，它可避免这 CFT 方法之缺点 ( 指有时很难发现抗体补体结合作用之反应 )，尤其这 ELISA 测定发现抗体对抗 APP 菌属第 5 型血清型菌株已成为标准化操作法。

　　这放线杆菌属胸膜肺炎菌血清型第 5 型又可分 5A 和 5B 二个亚型菌株如同第 1 型血清型菌株可分 1A 和 1B 二个亚型菌株。在加拿大猪胸膜肺炎急性型病例中，最常见是 APP、第 5 型菌株，其次是第 1 型菌株。然而在慢性型感染猪只，第 1 型血清型菌株之流行性和第 5 型血清型菌株之流行性是相似情形。由於许多急性猪胸膜肺炎由於这血清型第 5 型菌株爆发病例，在最近於丹麦也有爆发病例，它是本病占第二位重要性之血清型菌株，在澳洲爆发本病也是相同丹麦流行性疫情 ( APP、第 5 型血清型菌株为本病居第二重要性病原体菌株 )。

　　这 APP 血清型第 5 型菌株之特殊抗原，已被研究报告指出，它和荚膜多糖类 ( CPS ) 具有关连性。这平滑脂性多糖类 ( S LPS ) 和外膜蛋白质和其他血清型菌株 ( 指 APP ) 呈现交叉反应。另外在 ELISA 测定法中，这 CBE ( 甲醛杀死整个细胞於生理食盐水煮沸抽出物 ) 已被当作抗原去发现抗体和 APP 作用之。这抽出物 ( CBE ) 之一些成份对於其他血清型菌株具有交叉反应作用。

　　他们 ( 研究人员 ) 也认为从水煮沸抽出物时期发现其成份，或在石炭酸抽出物以後，对於长链脂性多糖类 ( LC LPS ) 它似乎是具特异性血清型型式菌株。因此本研究之目的，是评估这 CBE 和 LP LPS 抗原在 ELISA 测定法中发现抗体和放线杆菌属胸膜肺炎菌血清型第 5 型菌株之作用情形。

三、材料和方法

　　本研究实验室取得这 APP 第 5 型血清型菌株可分 5A 和 5B 二个亚型菌株，分别以 81 750 和 K17 代号之。而在本研究中共计取得 1123 个血清样品中，其中 53 个血清样品是人工实验性感染猪只得到之，它是人工接种 APP 第 5 型血清型菌株 5A 亚型菌株 ( ATCC 33377，K17 ) 或 5B 亚型菌株 ( 代号 B78，L20 或 81 750 菌株 ) 处理之。那些样品之许多血清取自本研究之实验室，许多其他血清样品取自美国肯萨斯州州立大学，丹麦，法国，加拿大和瑞士等大学或实验室之材料，其菌型分类参考表一资料。

表 一   在 ELISA 测定法猪血清和 APP 血清型第 5 型菌株之长链脂性多糖类 ( LC LPS )

　　　　　　　    抗原作用评价情形

　　　代号说明：★使用 ATCC33377.L20.81 - 750 和 B78 - 3760 等菌株。

　　　　　　　　▲自然感染在这慢性感染，即无症状带菌猪。

　　　　　　　　＊表示急性自然感染。

　　　　　　　　#表示未感染这 APP 菌株。

　　　　　　　　Fs 野外型 ( 田间，养猪现场 ) 菌株。

四、结　果

　　参考表 2、3，许多实验室操作技术省略介绍。

表 二   本研究中猪只感染不同病原体和未感染 AP 病原体取得血清样品，在 ELISA 测定法，

其二种不同抗原和 AP 菌属血清型第 5 型菌株作用情形，使用平均学密度表示

　　　AP：猪放线杆菌属胸膜肺炎菌。

　　　ELISA、CEB 和 LC - LPS 等说明参考前述或表三附注。

　　　---：表示没差异                          +：表示有差异

表 三    在本研究中发现抗体对抗 APP 第 5 型血清型菌株之敏感作

用和特艺性作用之表现 ( 使用 ELISA 测定法 )

　　　　　　　　　ELISA：酵素结合免疫学吸附作用。

　　　　　　　　　CBE：自然煮沸抽出物。

　　　　　　　　　LC - LPS：长链脂性多糖类。

　　　　　　　　　本文摘要於 Veterinary  Microbiology   1994 年 1 月刊。

五、结语和认识

　　1.猪胸膜肺炎在本省养猪业已危害 20 多年了，至目前为止在发病率和死亡率很高比例，虽然疫苗免疫策略也实施廿年了，似乎愈来愈猖獗倾向，因此疾病之发生不祗是单纯性病原体引起，它包括猪群饲养密度，环境，管理制度，设备，营养，药物饲料和卫生条件……等均有密切关系，而且疫苗之主要因子或成份，是否真正可控制疫病，可分离或其抽出物是否真正这主要因子，其技术学不是三、五年可以驾轻就熟的。

　　2.本病之病原体，在传统上称之嗜血杆菌胸膜肺炎菌 ( HPP )。最近二年来，正式确定为放线杆菌属胸膜肺炎菌 ( APP )，在血清学上至少可分 12 型血清型，在第 1 和第 5 型菌株又可分亚型菌株，以及尚有未定型血清型。加以本病之混合感染病毒性，霉浆菌属，巴氏杆菌属，沙氏杆菌属以及其他病原体因此如何将疫苗包含各种抗原才能发挥免疫效果是一个重要课题，笔者从未改变置疑性。

　　3.其实控制和治疗本病，倘若人力、时间及经济效益许可，不排斥疫苗免疫方式，但必须更重视其他可影响因素。主要的要依规定按步就班，从基本工作脚踏实地做起，一切问题均可以突破。本病之诊断和治疗是很特异性可区别於其他疾病，但是篇幅有限，不在此详细比较。

　　4.由於放线杆菌属胸膜肺炎菌不同血清型菌株造成疾病，所使用药剂有二个不同药性之制剂，例如有 10 多年来，本病使青霉素、安比西林制剂属於格兰氏阳性菌药效者，均认为无效，但是 2 ~ 3 年以来临床治疗也具有良效，而且从实验室药物敏感作用测定证明之，尤其指本菌属第 1 型为代表者，另外有其他血清型菌株也具有效。当然其他可利用市售药剂很多，不胜频举，不过要提醒，观察使用某药剂没显着改善时，要及时换药处理，等待实验室结果才动作已缓不济急，错失 90%之控制能力。因此临床兽医不必也不必管到其血清型菌株，参考本节对本病认识後，将具有信心全盘掌握疫情。至於研究结果提升养猪水准，相信很多现场工作人员经常无暇去分析和判定。

中国畜牧杂志第五十四册合订本

1995年七月号至1995年十二月号

第 27 卷 (95) 第 10 期 ( 17 ~ 22 )