科學與孵化的藝術
摘 要 家養禽蛋的人工孵化現在已高度成功，但是，對孵化期發育中的胚胎面臨的問題之認識仍在進展，其中一些有助於孵化過程的”和諧”。本文特別論述了應用孵化期涼蛋作為延遲出雛時間的方法，應用蛋的重量特異性水汽傳導力以預測來自於不同禽種和品系之最適濕度條件，應用蛋表屬的去除以改進胚胎呼吸氣體的交換，以及有關蛋的衛生方面的問題。
孵化力問題通常可追溯到種禽的無生育力，營養錯誤，疾病狀況，蛋的處理不善或衛生措施不妥，而非孵化技術本身的錯誤，本文敘述了一個有趣而嚴重的孵化力問題之解決步驟，其原因被追溯為種雞飼糧中出現了木棉籽餅粉。
一、前 言孵化過程是既複雜又非凡的。說它複雜，是因為它包含了能將蛋黃和蛋白的化學混合物轉移到雞的發育過程，說它非凡，是因它盡管複雜，但卻能正確進行而很少出現錯誤。用母雞孵蛋，受精蛋的孵化力達89％(Tretyakov, 1937)。
採用人工孵化，多年來，其成功率已經並將繼續得到提高。我知道，自Kirk (1976)以後，在聯合王國就沒有正式的調查研究了。但是從英格蘭的Cobb育種公司可獲得肉用種雞繼續得到改進的方法。1988年，從歐洲的150萬隻父母代中抽樣25％的優秀雞群，其入孵蛋的孵化力達84.9％，而5年和10年以前，孵化力分別為82.6％和81.2％。
雖然孵化力得到穩定提高，但是，我們必須考慮到近年來孵化過程本身並未有所改變這樣一個事實。我們得尋找提高孵化力的理由，當然不是特別從蛋的孵化途徑去尋找，而是從對遺傳學、營養、管理和種禽的健康的更深的認識著手。種禽場和孵化廠的衛生措施亦已正在得到改進。
所以，對於現在業已高度成功的、顯然很難得到進一步改進的孵化過程，我還可能論述什麼呢？首先，熱衷於了解發育中的胚胎的更為詳盡的生理學以及孵化期面臨的問題之科學家，已經取得了很多成就。我將論述有助於使孵化過程”和諧”的最近的一些科學進展。其次，因為總的看來孵化是如此成功，所以，推廣工作多從事於對孵化過程出現錯誤時的調查研究，而很少針對試圖提高孵化力。我將略述西蘇格蘭學院最近實施的一項調查。在這樣短的文章裡，我不可能涉及孵化的全部領域，但我希望有一些問題能引起每個人的注意。在本文的第一部分中論述孵化過程的”和諧”時，我將採用Luudy (1969)的方式，逐個考慮影響孵化力的四個主要的物理因素。
二、孵化機溫度
在現代商用機械通風的孵化機內，溫度通常設置為37.5°∼37.8℃，並保證蛋內溫度與此相同。在孵化後期，胚胎代謝產熱使絨毛膜－尿膜內溫度升高於孵化機1.5℃(Sotherland等，1987)。這提出了一個問題：種蛋在恆定的孵化機溫度下或在恆定的胚胎溫度下孵化，能獲得最高的孵化力嗎？雖然在雛期傾向於降低溫度，但在多期(multi－stage)孵化機內，我們在孵化期是無所作為的。但是，用新一代的電腦控制的單期(single－stage)孵化機做的試驗有助於回答這個問題。
Sarpong和Reinhart (1985)報導，肉用種雞蛋在孵化第16天涼蛋至22℃是有利的。隨著涼蛋時間的延長，他們記錄到了受精蛋出雛數得到增加，試用的最長涼蛋時間(24小時)獲得了統計上顯著的出雛數的增加。他們提示，涼蛋可降低胚胎的代謝率並減輕代謝超量產熱引起的緊迫。
Lancaster和Jones (1988)重複並擴展了Sarpong和Reinhart (1985)的試驗，發現孵化第16天在22℃下涼蛋持續48小時對孵化力無顯見的影響；但涼蛋30小時以上使雛雞質量下降。Lancaster和Jones (1988)也證實，孵化14至18天的種蛋可同樣實施涼蛋至22℃而無有害影響，但若溫度低於21℃左右則對孵化力有害。他們發現，在孵化第16天涼蛋至26.7℃持續24小時亦無有害影響。Biellier (1944)發現26.7℃足以起動新鮮受精蛋的胚盤之發育。
Lancaster和Jones (1988)報導涼蛋至26.7℃的胚胎比從孵化機溫度涼蛋至26.7℃以下的胚胎早出雛數小時。
在商品生產實際中，很可能應避免將蛋以孵化溫度涼至”生理零度”(約26℃，Lundy, 1969)以上的溫度，原因是在這樣的溫度下胚胎發育仍在進行。Kanfman (1948)報導，臨時涼蛋至涼蛋至不能使胚胎完全停止發育的溫度，比涼蛋至使胚胎完全停止發育的溫度更為有害。
Romanoff等(1938)發現，在孵化第16天胚胎涼至29℃持續24小時，其出雛前的死亡率高於對照組。
然而，不管怎樣，商品生產實際中為什麼需要涼蛋呢？在我閱讀了Sarpong和Reinhart (1985)的論文幾天後，我接到來自於一個公司的電話，那裡不久將要出雛大量的預訂了的雛雞。買主告訴公司，計畫下周星期四進雛雞的育雛舍不能準備好，但改期在星期五可以進雛雞。奇怪的是，Sarpong和Reinhart (1985)未提到作為涼蛋的結果，孵化期可延長；但是，假定涼蛋能延長孵化期，我便能建議，在孵化第16天涼蛋至22℃持續24小時，即可解決孵化廠經理面臨的這樣一個進退兩難的問題。Lancaster和Jones (1988)注意到孵化期的延長時間大約等於在22℃下蛋的放置時間。
正如Lancaster和Jones (1988)指出，涼蛋不失為用於延遲出雛時間的一個管理手段。除了已評述的例子外，當業已實施的入孵時間對孵化廠不合適時，涼蛋可使出雛時間與推延了的提取雛雞時間更精確地同期化。實施涼蛋時，涼蛋最佳溫度應為多數孵化室的室溫。
本文未涉及孵化期胚胎對高溫緊迫的耐受性。讀者可參閱Ande和Wilson (1981)的文獻綜述及其參考文獻。
三、孵化機濕度
蛋殼上有數以千計的微小氣孔，這對孵化期呼吸氣體的交換是必不可少的。但是，由於水可通過這些氣孔蒸發，所以蛋內容物中的水份不斷散失。
孵化期必須控制受精蛋周圍的濕度，以保證良好的孵化力(Lundy, 1969)和適當的孵雞大小(Tullett和Buton, 1982；Burton和Tullett, 1985)，原因是這兩個變量均受孵化期蛋的總失重的影響(Tullett, 1981；Tullett和Burton, 1982；1986)。對於家養禽種，至出雛前胚胎啄殼，孵化機濕度使蛋的平均失重等於鮮蛋重的12％左右(Tullett, 1981；Meir等，1984；Hulet等，1987)。因為胚胎的呼吸氣體交換(呼吸商接近0.727)不使蛋的質量(mass)變化(Drent, 1975)，所以，蛋的這種失重完全是由於蛋的失水所致。
孵化過程中，直至啄殼前，存在促進水份擴散的吸引力(attraction)。根據Fick的第一擴散原理(Ar等，1974)，當蛋殼仍是完整的時，水份的擴散由兩個因素決定：(1)蛋殼對水汽的傳導力；(2)孵化機濕度：
MH2O＝GH2O×△PH2O………〔1〕式中，
MH2O＝蛋的失水量(毫克／天)
GH2O＝蛋殼對水汽的傳導力，以每天每托(毫米汞柱)的水的毫克數表示
PH2O＝蛋殼內外水汽壓力差，以托(毫米汞柱)表示
以及△PH2O＝PeggH2O－PincH2O………〔2〕式中，
PeggH2O＝蛋內水汽分壓。假定為飽和水汽壓力，以在蛋在溫度下之托(毫米汞柱)表示。
PincH2O＝孵化機內水汽分壓，以托(毫米汞柱)表示。
(托，torr，為真空單位，相當於1毫米汞柱的壓力。譯注。)
在孵化期對許多蛋採用Tullett (1981)描述的技術可容易地測量蛋殼對水汽的傳導力。為了預計孵化期獲得最適失重的孵化機濕度，需要確定蛋殼傳導力與解蛋重之間的關係。開始(譬如Tullett, 1981, 1982)，這由一個標繪圖描述出來。在這樣一個標繪圖上，任何通過原點的直線，與蛋相連，這些蛋便具有相同的孵化期鮮蛋失重的百分率。
圖中，畫出了三條斜線，如果孵化機濕球溫度為斜線上標出的溫度，則鮮蛋的失重等於12％。因此，我們能容易地正確了解所需的孵化機濕度，以便隨著雞群日齡增長和隨著蛋重增加而獲得最適失重。全部預測所依據的乾球溫度是37.8℃。
一般說來，隨著肉用種雞群日齡的增長，蛋殼的水汽傳導力與蛋重成直線增加，這樣，一種孵化機濕度(濕球溫度28.9℃或84℉)會導致孵化期鮮蛋平均失重12％，而不考慮雞群的日齡。
火雞的最適濕度範圍比肉用種雞寬。這或許是這樣一個事實的反映，即火雞不像肉用種雞那樣實施過強度的選拔和應用。
鴨的開產蛋不能在正常孵化機濕度下成功孵化。在產蛋的第一週，蛋小且蛋殼傳導力低。第二週產的蛋較大，但蛋殼的傳導力仍然低，即使在指示的失重12％的低濕度下，仍不能良好孵化；儘管失重正確，但傳導力低仍然是個問題，因為在胚胎發育期它不可能使胚胎獲得足夠的氧，或排出足夠的二氧化碳。這個問題及其解決的途徑將在孵化機通風部分討論。
斜線的斜率表示蛋殼的水汽傳導力與鮮蛋重的比例。這個比例叫做重量特異性水汽傳導力。具有相同重量特異性傳導力的蛋，孵化期鮮重的失重百分率相同。蛋的重量特異性傳導力一旦建立，就可能對孵化機的最適濕度條件進行直接預測，這樣的條件可使雞、鴨和火雞蛋失重12％。對不同孵化期的其它禽種亦能建立同樣的數據。重量特異性水汽傳導力不但接受為預測孵化機最適濕度的預測器，而亦作為相對於蛋重的呼吸氣體交換率的預測器(因為蛋殼對水汽的傳導力可直接轉換為蛋殼對氧和二氧化碳的傳導力)。所以，孵化期的濕度和通風需要量均可計算出來。
孵化機內任何一批入孵蛋內，蛋殼水汽傳導力和鮮蛋重的變異總是有寬的變異幅度，因此，即使鮮蛋重的平均失重等於12％，這個平均數仍然有變異，這尤其在火雞中得到了明晰的證實(譬如，Tullett, 1982；Meir等，1984；Hvlet等，1987；Meir和Ar, 1987)。根據Tullett和Burton(未發表資料)從商品孵化廠的數千枚蛋獲得的資料，對於一個群體的任一批蛋，孵化期蛋的失重率或重量特異性傳導力的變異系數通常為15∼25％。文獻報導的各種不同的變異系數為：雞蛋22％，Visschedijk等(1985)；火雞蛋18％，Meir等(1984)；43種鴨和鵝蛋平均18％，Hoyt等(1979)；另外57種鴨、鵝和天鵝蛋21％，French和Board (1983)；包括許多野禽在內的29種禽蛋24％，Ar等(1974)。
Simkiss (1980)提示，生理機制通常限制了機體對環境變異的依賴，這就意味著發育中的胚胎應能耐受蛋的一定範圍的失水。確實如此。Hoyt (1979)發現，當孵化期胚胎處於不同的失水率時，胚胎可通過變化從尿囊液中的吸水率而進行滲透調節。Simkiss (1980)提出，通過蛋內水的再循環，胚胎能生長至與供水足夠的胚胎一樣大小。
在對火雞受精蛋的研究中，我的兩個學生(Stewart, 1987；Connell, 1988)分別觀察到至啄殼時失重率9∼20％和10∼19％的蛋的孵化力相應為80％以上和85％以上。但後一個結果因群體日齡的不同而有混淆。對小火雞質量的影響也值得進一步研究。
Davis和Ackerrnan (1987)提出，在水緊迫的胚胎中，滲透調節是不完全的，以至於不能使胚胎生長率適應蛋的含水量。他的研究結論是，水緊迫的胚胎有脫水現象。這或許有助於解釋Meir等(1984)和Meir和Ar (1987)的發現，即，將重量特異性水汽傳導力低，中和高的火雞蛋分別在低、中和高的濕度條件下孵化，結果獲得了受精蛋的最高孵化力和最佳的小火雞質量。
四、翻 蛋
為了保證獲得良好的孵化力，在孵化的第4和第7天之間必須進行翻蛋(New, 1957)；Deeming, 1989)。翻蛋的益處被解釋為可防止胚胎外膜以及胚胎外膜與內蛋殼膜的內層之間發生過早粘連，這種粘連將導致隨後胚胎發育畸形(New,1957；Fr-eeman和Vince, 1974)。最近的研究集中於對發育中的蛋內的各種液體分隔室之影響。New (1957)發現，急需翻蛋的時期應與次級胚胎液的形成一致，這對於胚胎的生存是必需的。然而，關於這個問題的研究幾乎沒有(New, 1956；Deeming，Rowlett和Simkiss, 1987)。若不翻蛋，就會推遲血管區域的擴大(Deeming, 1959)，延緩次級胚胎液的形成(Deeming等，1987)，導致胚胎生長減慢，改變尿囊液和羊水的容積以及使孵化後期對蛋白的利用產生變化(Deeming, 1989)。胚胎生長的延緩與下述變化聯擊在一起：(1)減少呼吸氣體交換(Tazawa, 1980)，此或許與絨毛膜－尿膜未完全沿內殼膜的整個內層排列有關(Tyrrell等，1954；Tullett和Deeming, 1987)；(2)血管區域擴增的減少，限制了胚胎的營養攝取量(Deeming, 1989)；(3)胚胎未能利用剩餘的蛋白(Tullett和Deeming, 1987)。
Buhr (1989)報導了使蛋傾斜而不是翻蛋的影響。他的結論是，每小時使蛋傾斜一次並立刻回到起始位置，增加了胚胎死亡率和胎位不正。因此，這並不是一個能替代常規翻蛋的可行措施。
Wilson和Wilmering (1988)的研究結論是，在孵化第16天停止翻蛋，對孵化力無不利影響。在其研究中，孵化第13天停止翻蛋，對來航種雞的孵化力無影響，但在5個試驗中有2個試驗顯示了這種處理對肉用種雞蛋的孵化力確有影響。在這些試驗中，當翻蛋停止時，把蛋垂直放置於蛋架上直至第19天，然後再把蛋移到出雛籃內。這樣做是為了研究將蛋垂直放置於高密度蛋架上對晚期死亡的影響。Proudfoot等(1981)報導，孵化13天後，將蛋移入出雛籃內平放，對孵化力無影響。
五、孵化機通風及胚胎呼吸氣體交換
孵化過程中，來自於孵化機空氣中的氧驅動著胚胎的代謝。通過蛋殼上的氣孔，氧進入蛋內，同時胚胎產生的二氧化碳從蛋內散失出來。由於水汽、氧和二氧化碳通過同樣的氣孔出入蛋內外，可以從質量而言的水汽傳導力變換為以容積而言的對呼吸氣體的傳導力。
GO2＝GH2O×(22.414÷18.02)×0.85………〔3〕
GCO2＝GH2O×(22.414÷18.02)×0.67 ……〔4〕
式中，22.414是氣體的克分子容積(升)，18.02是水的分子量，0.85是空氣中氧和水汽的擴散系數比，0.67是空氣中二氧化碳和水汽的擴散系數比(Paganelli，Ackerman，Rahn, 1978)。
氧的消耗量和二氧化碳的產生量可由以下公式定義：
VO2＝GO2×(PincO2－PeggO2)………〔5〕
和VCO2＝GCO2×(PeggCO2－PincCO2)………〔6〕
式中，VO2和VCO2分別為氧的消耗量和二氧化碳的產生量，用每天立方厘米表示；GO2和GCO2分別為蛋殼對氧和二氧化碳的傳導力，用每天每托(或毫米汞柱)立方厘米表示；PincO2為孵化機內氧的”有效”分壓，用托或毫米汞柱表示(見Wan-gensteen和Rahn, 1970)；PincCO2為孵化機內二氧化碳的分壓(托或毫米汞柱)；PeggO2和PeggCO2分別為蛋內氧和二氧化碳的分壓(托或毫米汞柱)。
隨著胚胎發育，氧的需要量和二氧化碳的產生量增加，使蛋內呼吸氣體的濃度改變；在肺呼吸剛要出現之前，蛋內空間中PO2降至100托(mmHg)左右，而PCO2升至40托(mmH)。在所有的禽種中，這兩個數值顯示了孵化的終點，並且被確信為產生對開始出雛過程的激發(Rahn等，1974)。
在我自已的工作中，我特別對胚胎可能面臨的問題感興趣，因為這些胚胎碰巧發現它們自已被包圍在傳導力高或低的蛋殼內。如果蛋殼的傳導力高，蛋內水的蒸發太快，就會有脫水的潛在危險。孵化廠若能確保蛋的周圍有足夠高的濕度，這個問題就能得到消除。但是，另外一個潛在的生理問題仍然存在，即，蛋內二氧化碳散失太多，這會導致血液緩沖能力喪失，改變酸鹼平衡，然而，這對胚胎的枆氧量、生長或孵化力並無顯著影響(Tullett和Burton, 1987；Girard和Visschedijk, 1987)。在Meir等(1984)和Meir和Ar (1987)的工作中，根據蛋殼傳導力把蛋分組，並在不同的濕度下孵化；研究者發現，蛋殼傳導力高的蛋在高濕度條件下孵化，獲得了最高的孵化力。這表明，正確的失水而不補償二氧化碳的高散失，乃是蛋殼傳導力高的蛋成功出雛所必需的。
對於被包圍在傳導力低的蛋殼內之胚胎，有三個潛在的困難：孵化期蛋的失水低；氧的短缺；蛋內二氧化碳產生太多，使血液PH降低。對於失水低的問題已有各種提示，包括在蛋內超量液體中胚胎被”淹沒”以及沾濕蛋殼膜而阻礙氧的攝取之可能性(de R’eaumur, 1749，Ar和Rahn, 1980，引用；Romanoff, 1930)。Meir等(1984)和Meir和Ar(1987)提及，他們把蛋殼傳導力低於平均值的蛋分出來，在低濕度條件下孵化，其孵化力有所改進。但是，他們觀察到這類蛋即使失重是最適的，其孵化力仍低於蛋殼傳導力中等或高的蛋。正如前面提到的，由於蛋殼傳導力極低而導致的種鴨開產蛋的胚胎死亡，不能通過使用足夠低的孵化濕度獲得正常失重而避免。這提示，對於被包圍在極低傳導力的蛋殼內之胚胎，呼吸氣體交換率低的問題亦需提出來。
隨著孵化的進行，胚胎的需氧率增加。Meir和Ar (1986,1987)發現，對於來自於蛋殼傳導力低的火雞蛋，在理想的濕度條件下孵化，可通過自孵化第18天起補充氧(23％)而使胚胎的孵化力增加。但是，他們提示氧的水平還可能進一步提高，這樣，蛋內胚胎可能經歷的高水平的二氧化碳可以得到抵消，以獲得最高的孵化力。
通過對蛋殼的吸收和產生的碳酸氫鹽的存留而增加血液碳酸氫鹽水平，通過尿酸的排泄而產生的腎的補償作用，胚胎能夠適當地耐受高水平的二氧化碳(Dawes, 1975)。這種機制有助於解釋隨著孵化過程，胚胎對二氧化碳的耐受力增強。這種現象在Taylor等(1965)，Taylor和Kreutziger (1965；1966；1969)和Taylor等(1971)的研究中明顯出現。來自於白色來航雞的蛋，其孵化力受到影響的孵化機二氧化碳濃度如下：孵化頭4天1％以上，第5天至第8天3％以上，第9天至第12天6％以上，但在其後的孵化期中即為7∼8％以上。在商品孵化實際中，二氧化碳的推荐水平通常低於或等於0.5％，但實際上測出的水平通常較高，尤其是在出雛機內。
讓我們回頭來看種鴨，開產蛋的表層對氣體的擴散有高的抵抗力。採用濃縮的氯溶液去除表層後，可以：(1)增加蛋殼的傳導力，尤其是起始傳導力低的蛋，其傳導力可提高100％(Deeming,1987)；(2)使種鴨開產蛋的孵化力提高(Kortlang,1986；Tullett和Burton, 1986)。在自然孵化時，鳧(Somateria)(mollissima)和長尾鴨(Clangula hymalis)的蛋由於與孵巢長期接觸，很可能去掉蛋的表層而提高了傳導力(Rahn等，1983)。
根據Deeming (1987)的研究，去掉家雞或番鴨蛋的表層並未顯示對水汽傳導力的影響。Peebles和Brake(1986)提供了有趣但使人混淆的證據，根據種雞日齡和蛋周圍的空氣濕度，去掉肉用種雞蛋的表層能提高或降低傳導力。Peebles等(1987)報導，去掉肉用種雞蛋的表層後唯一提高了傳導力。去掉火雞蛋的表層後提高了蛋殼傳導力(Christensen和Bagley, 1984)。Deeming (1987)，發現最初傳導力高的蛋殼還可記錄到提高傳導力20％，這個發現亦應用在鵝蛋中。
在蛋殼表層對呼吸氣體交換具有高阻力的蛋中，去掉表層可以解決氧和二氧化碳通過蛋殼的交換率低的問題。但是，因為傳導力增加，所以，結果是水的散失較多。這可以採用較高的孵化機濕度得到抵消。採用這種操作程序，孵化機衛生必須得到改進，因為蛋的表層對於微生物貫穿蛋殼具有物理阻礙作用。
六、蛋的衛生
種雞管理影響孵化廠成績之一個方面是產蛋箱的管理和促使雞在箱內產蛋。蛋產出後不久就能受到污染，其時蛋內容物從母雞體溫涼至雞舍溫度。硬性蛋殼內蛋內容物的收縮促使微生物通過蛋殼上的氣孔進入蛋內，尤其是在蛋的表面是潮濕的情形下。蛋殼一旦有裂口，要殺死微生物就會危及到胚胎。雞舍內的窩外蛋尤其易被微生物貫穿入蛋內；實驗中，這種蛋的孵化力總是比清潔的巢內蛋低10∼15％(未發表資料)。
七、胚胎的脂肪代謝及與木棉籽餅粉的遭遇
在西蘇格蘭學院，我們對家禽的脂肪代謝有廣泛的興趣，尤其是在孵化期發育中的胚胎對脂肪的利用方面。研究興趣主要在肉用種雞。
通過對肉用仔雞生長和對種雞產蛋量的成功的選拔，母雞有了更早的開產日齡。開產蛋小而不能良好孵化。所生產的雛雞個體小且出雛後死亡率高(Smith等，1985)。開產蛋還表現出從蛋黃內容物進入卵黃囊膜的脂類代謝率的降低(Noble等，1984；1986)。這或許與這樣一個事實有關，即，年青種雞的蛋之孔隙度低，限制了胚胎的生長並減慢其生化過程(Burton和Tullett, 1983；1985)。這或許是來自於年青種雞的蛋的孵化期較長的原因(Shanawany, 1984)。年青的父母代雞的蛋黃中含有的磷脂和膽固醇較之成年父母代雞為少，而甘油三脂較多(Noble等，1986)，所以，僅僅通過對早期種雞飼糧中的脂肪加以變化，年青肉用種雞蛋的孵化力就已經得到提高(Noble和Tullett, 1989)。
脂類分析的鑑定為一個有趣而嚴重的孵化力問題提供了解決方法。這個問題出現在1986年11月末，同年12月變得嚴重，1987年1月問題繼續存在(其時西蘇格蘭學院正對之進行調查研究)，1987年2月問題最終消失。開始，曾有70∼80％孵化力的肉用種雞群突然產生了一些令人驚奇的結果。12月初，出雛數幾乎為零！隨後，孵化率僅為10∼40％，並持續到1987年1月末，孵化力才開始恢復到正常水平。
雖然孵化力嚴重降低，但從孵化機轉移到出雛機的百分率卻似乎正常。但是，孵化廠的一個經理報告，他們轉盤照蛋時發現這些蛋”看起來異常”。幸運的是，問題一出現，這個經理就把兩盤”照檢淘汰”的蛋呈送給西蘇格蘭學院進行檢驗。其中一盤的觀察結果是：4枚蛋屬”早死”(孵化第1和2天)；7個胚胎死於血環期(第3天)；4個胚胎死於大約孵化第5天；15個胚胎死於大約孵化第12天(主要依據胚胎大小和短羽的出現判斷)。確定胚胎死亡的時間主要是根據其大小，原因是與4個死於孵化第5天的胚胎不同，血環期的胚胎只有極少的血液形成。孵化第5天，血雛剛剛可以見到，但是顯見的血液中仍無一個可用來分辨該發育期的構造。到孵化第5天，卵黃囊應該包圍蛋黃，血管應該明顯可見。
12日齡胚胎證實循環系統業已受到影響，幾乎不能見到血液，則無可見的絨毛膜－尿膜的發育，而通常情況下，孵化第12天絨毛膜－尿膜已沿內蛋殼膜的整個內層排列。12日齡胚胎是蒼白的(貧血)，儘管通過不正常的透明身體壁(body Wall)觀察，內部器官看起來是粉紅色的。對胚胎的更接近的檢查提示血管和絨毛膜－尿膜已出現，但由於通常貫通這些結構的紅血細胞無色，所以，開始還不能被肉眼明顯看見。
在正常的蛋殼內死亡分析中，幾乎沒有12日齡胚胎死亡的情形。對這種”中期”死亡的解釋通常是營養性的因素。對貧血的解釋是，鐵的可能缺乏是明顯的，這會影響血色素(血紅蛋白)的形成。但是，如果飼糧中鐵缺乏到足以導致這些異常，種雞應該業已受到影響；但是，這些種雞卻表現正常，產蛋率也正常。隨著我的心思進入”鐵”時，我在Landauer (1967)的第109頁上發現了下述段落：
棉籽餅粉或棉籽油混合進種雞飼糧可降低蛋的出雛質量……其對胚胎存活力的干擾……可最終追溯到環丙烷脂肪酸，malvalic酸和苹婆酸的出現。雖然這些化合物作用的精確方式還未知，但是它們看來是通過以下途徑產生影響的：提高膜的滲透力，擾亂脂類代謝，釋放蛋黃中的鐵，以及可能改變蛋黃的內部結構。
我的一個同事，Ray Nobly博士，僅在幾個月前遇到了包含環丙烷脂肪酸的問題。彼時，用的是人消費的蛋，”對蛋黃內部結構的改變”僅僅針對最明顯的特徵。消費者抱怨蛋黃象油灰或橡膠一樣，可以豎立，幾乎呈圓球形，甚至當把蛋打破在一個平坦的表面上時也如此。蛋黃常常具有粘稠性，以致於其不能被人的食指和姆指抓起來而不受到損壞。Shenstone和Vickery(1959)發佈了一個特別好的照片。我們把這種蛋黃簡稱為”高爾夫球”蛋黃。這個問題的原因可追溯到飼糧中用了含環丙烷脂肪酸的原料，最可能的是棉籽或木棉籽餅粉。
一些種禽場在發生孵化力問題時，在一些蛋中觀察到”粉白”色，這進一步證實種雞群飼糧中出現了環丙烷脂肪酸、malvalic酸和苹婆酸。已知這些酸可把蛋黃中的鐵釋放，而進入蛋白，並在這裡與伴清蛋白(conalbumen)結合而呈現粉紅色(She-nstone Vickery, 1959；Phelps等，1965)。
在產蛋母雞的肝臟中，malvalic酸和苹婆酸可干擾△9－脫氫鋛體系。一個將硬脂酸(18：0)轉變成油酸(18：1)的鋛體系受到影響(Allen, 1967)。結果是，飼餵了環丙烷脂肪酸的母雞肝臟生產的蛋黃成份中，硬脂酸對油酸的比例高於正常雞(Ev-ans等，1961；1962；Abon-Ashour和Edwards, 1970)。飼料中malvalic酸和苹婆酸的分析是複雜的，儘管最終還是做了分析，但是，分析蛋黃中硬脂酸和油酸含量已被證明是更容易的、更快的，而且(最後)是解決這個問題的更有用的方法。表1列出了來自於供人消費的蛋的正常蛋黃和”高爾夫球”蛋黃，以及來自於出現孵化力問題之第一批死胎樣本中的早死和12日齡死亡胚胎的蛋黃中，硬脂酸和油酸的水平。
表一 蛋 黃 脂 肪 酸 中 硬 脂 酸 和 油 酸 的 百 分 含 量
| 脂 肪 酸 | 正常蛋黃 |
“高爾夫球” 蛋 黃 |
“早死胚胎” 蛋 黃 |
12日齡死亡 胚胎蛋黃 |
| 硬脂酸(18：0)油 酸(18：1)
18：0／18：1 |
7.5 43.3 0.17 |
22.8 26.9 0.85 |
18.9 31.3 0.60 |
19.7 30.2 0.65 |
開始的調查研究值得記錄，因為在隨後的孵化廠抽樣中，孵化期胚胎死亡發生得晚些，所以，開始的樣本中出現的胚胎異常的貧血再未見到。幸運的是，第一個樣本已送來研究，否則，問題的答案可能還未找到。
最初的分析證實了問題的存在並指明了其可能的原因，隨後，對從不同的雞場的鮮蛋獲得的蛋黃樣本進行了進一步觀察，以預測可能的孵化百分率。觀察結果是，當蛋黃總的脂肪酸中硬脂酸超過12％，油酸低於40％時，以及當硬脂酸對油酸的比例超過0.25時，孵化力就會受到不利影響。
由此表明，產蛋雞群飼糧中環丙烷脂肪酸的出現是導致以上問題的原因。孵化力問題被追溯到木棉籽餅粉的使用，電子顯微鏡觀察到了飼料中的木棉籽餅粉微粒。木棉籽餅粉是一種高纖維、高蛋白的原料，但是，如果不對家禽飼料作特別的配合，其氨基酸不能平衡。木棉籽餅粉可用於成年反雛動物，但是，當飼料廠用之於反雛動物飼料而對飼料批次之間又無有效的清除系統時，家禽飼料就可能受到污染。
在另一個試驗中，我們研究了木棉籽餅粉的用量。發現飼糧中木棉籽餅粉低至1％的水平可導致甘油三脂部分的脂肪酸的巨大變化，而對磷脂部分則無影響。木棉籽餅粉比例達8％時，複製出了前面遇到的”高爾夫球”蛋黃病。所以，生產食用或孵化用蛋的家禽，其飼糧顯然不應添加或污染木棉籽餅粉。
與木棉籽餅粉的遭遇有助於突出這樣一個事實，即，當孵化力下降時，通常並不是孵化技術本身出現了錯誤。現在孵化過程的實施已有高度的可靠力，因此，多數孵化力問題的原因通常可追溯到種雞的不育、錯誤的營養、疾病、蛋的管理不善和衛生措施不妥。
摘譯自Poultry Science，1990年第1期
飼料營養雜誌(77~88)
92年．第三期─蔣小松、蹇兵譯
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