雞大肝脾病的研究進展

顧名思義，雞大肝脾病 ( Big liver and spleen disease , BLS ) 就是以肝臟腫大和脾臟腫大為特徵的一種傳染病，1980 年首次發生於澳大利亞，Rarni 氏對本病做了詳細的描述；於 1984 年 Curtin 氏建立的診斷該病的免病瓊脂擴散法 ( immune agar diffusion test )，在澳大利亞等國已得到廣泛應用。鑑於在該國的東南部新南威爾士州 ( New South Wales ) 屢屢發生，因此 Handlinger 和 Williams 於 1988 年又再一次追述了本病，以引起各國學者的注意。雞大肝脾病的病原學雖然最後尚未確定，但英國、美國、紐西蘭等國家，已經通過血清學的調查證實一些雞群感染過此病。在中國大陸，雞肝脾病於 1995 年徐福南等就有所報告，並於 1996 ~ 1997 年譚勛等、單松華等、楊德吉等還做了流行病學初步調查和血清學調查，都認為雞大肝脾病感染在國內存在，而且感染的範圍較大。本病固然可以傳染廣大雞群，但最主要的還是感染“肉用品種”的種母雞，特別是艾維茵 ( Avian ) 和 AA 品種等。雞患病後精神萎頓，不思飲食，產蛋量急驟下降，死亡率增高。下面就雞大肝脾病的病原、流行病學、病理變化、臨床症狀、診斷要領和防治對策等，特別是近年研究進展方面的，簡單的做一文獻綜述。

既然是病原學未加確定，我們不妨稱其為“雞大肝脾病因子”( Big liver and spleen disease factor , BLSF )。將病材經過 0.22 微米 ( um ) 之濾膜 ( filler membrane ) 濾過後，接種雞時會發生雞大肝脾病；而且 BLSF 與任何已知的家禽病原沒有血清學交叉反應 ( cross-reacting )，因而被認為是一種傳染性病毒疾病。

Avery 氏曾於 1988 年用電子顯微鏡檢查肝組織和組織培養物時，發現了一株細胞培養因子，當時他把這種病原體稱作“顯披膜病毒”( togavirus like )，並且對有機溶劑 ( organic solvent ) 十分敏感，因而推測是一種有囊膜的病毒。Curtin 氏在一篇實驗報告中說，用雞胚肝細胞 ( chick embryo hepatocyte ) 則能分離到一株可產生“細胞病理效應”( cytopathic effect ) 的雞大肝脾病因子。McFerran 等又於 1993 年報導稱，用雞大肝脾病的病材經過離心後，再接種雞胚腎細胞 ( chick embryo renal cells )，能從中分離到一株有囊膜的核糖核酸病毒 ( ribonucleic acid virus , RNA virus )。但是，這些因子 ( 無論哪一個 ) 回歸動物都沒有獲得成功。

與此同時，還試行了其它種種實驗研究，諸如曾用肝、脾材料尿囊腔 ( allantoic cavity ) 接種雞胚 ( 連續十代 )、火雞胚 ( 四代 )、鴨胚 ( 七代 )，卵黃囊 ( vitelline sac＝yolk sac ) 和絨毛尿囊膜 ( chorioallantoic membrane ) 接種雞胚 ( 連續八代 ) 等，企圖分離病毒都沒有獲得成功；還用電子顯微鏡或免疫電子顯微鏡，檢查肝、脾、糞便、組織培養上清液 ( supernatant fluid )、超薄切片 ( ultrathin section ) 及瓊脂擴散試驗沉澱線等，也沒有找出確切之病毒。

感染雞大肝脾病因子的雞隻，其肝、脾以及血清中，可以用瓊脂擴散試驗很容易找到抗原 ( antigen )。此抗原是一種低分子量物質，為一鹼性蛋白質 ( alkaline protein )；分子量大約是 10 ~ 20 kD ( kilodalton )，在瓊脂擴散試驗中可以凝集成分子量為 45 kD 的凝集物。在大規模雞大肝脾病爆發當中，未見有抗原變異 ( antigen variation ) 的血清學證據；但在標準化肉用雞群的飼養條件下，把這些雞給予雞大肝脾病因子感染，其“疾病嚴重種度”的不一致現象，可能反映了各“株”之間不同的差異性。

在體外培養雞大肝脾病因子也沒有成功，例如曾用已知的“病材”，接種雞胚成纖維細胞 ( chick embryo fibroblast )、雞胚肝細胞 ( chick embyo hepatic cell )、雞胚腎細胞 ( chick embryo renal cell )、雞骨髓細胞 ( chick marrow cell )、鴨胚成纖維細胞 ( duck embryo fibroblast )、猴腎細胞 ( monkey kidney cell ) 等禽類和哺乳動物的細胞，均不能引起“細胞病理效應”( 上述 Curtin 氏的實驗報告例外 )。

用標準雞大肝脾病抗體和抗原，與馬立克氏病 ( Marek's disease )、傳染性法氏囊病 ( infectious bursal disease ) 或雞腺病毒 ( adenovirus ) 的抗原和抗體做免疫瓊脂擴散試驗時，均無沉澱線出現，說明免疫瓊脂擴散試驗法對雞大肝脾病具有一定的特異性。

至於雞大肝脾病因子的複製 ( duplication ) 部位或方式尚無直接的證據，不過 Clarke 氏等用螢光素標記 ( fluorescein label ) 家兔或雞大肝脾病的抗血清時，可以檢測到肝、脾切片胞漿口的雞大肝脾病 A 抗原 ( A antigen )，但這個 A 抗原與病毒複製之間的關係尚不清楚。家兔或雞隻的肝、脾其吞噬細胞 ( phagocyte ) 的胞漿當中，所出現的雞大肝脾病抗原，暗示病毒的複製可能在吞噬細胞之外。

許多實驗研究證實，雞大肝脾病是“接觸性傳染”，雞大肝脾病因子存在於病雞的血液、肝、脾、腎等組織中；有關“自然傳播”之途徑不甚清楚，不過在有些地區其肉用雞也可自然發生，如在澳大利亞經常於夏、秋季盛行，這可能與媒介昆蟲有關。

雞大肝脾病在澳大利亞的許多州呈散發流行；但在新南威爾士州的一些地區，可能存在著地方性流行或 ( 不經常的 ) 爆發性流行。雞大肝脾病因子的傳播可發生於任何年齡，在一個六仟至八仟羽種雞的雞舍內，其因子在一週內可傳播到大多數雞隻，二至三週後大多數雞隻可出現血清陽性抗體；但在不同的雞舍之間，其傳播要慢許多。

在中國大陸也做了許多的調查研究，實驗報告不少。例如，楊德吉等 ( 1997 年 ) 對安微、江蘇、山東三個省的四個雞場艾維茵種母雞進行了血清學調查，他們將“血清樣品”和“肝脾病材”都按照不同的週齡分為四個組，以比較各個組間差異性 ( 詳見表一及表二 )。根據結果作者認為，不同週齡的雞隻，無論是血清中的抗體還是肝、脾中抗原，其檢出率都各有不同，有隨著週齡增大而增加的趨勢。其一，可以說明該病具有傳染性，隨日齡的增加而蔓延；其二，表明這種蔓延速度並不快，雞大肝脾病可能屬於一種相對慢性的感染。

週齡

樣品數

陽性數

可疑數

陽性率

36.7%

27.7%

6.0%

週齡

樣品數

陽性數

可疑數

陽性率

46.7%

33.3%

17.5%

註：表一及表二皆於 37℃ 24小時後觀察結果，隨後進行一次重複瓊擴試驗，

兩次結果均為陽性者判定陽性；一次為陽性一次為陰性者判定為可疑；兩次均為

據部分資料提示，母雞產蛋的“卵黃”中，也有大約四分之一左右的雞大肝脾病抗體檢出率，說明幼雛可獲得較高水平的母源性抗體而可抵禦感染。典型的雞大肝脾病可以“垂直傳播”( 上一代傳染給下一代 )，多發生在三週齡左右的子代，比“種雞群”出現的抗體要早一些；隨著種雞群陽性抗體的出現，垂直傳播從而終止並不再發生。

除年齡之外，影響雞大肝脾病因子感染的表現仍有許多因素，這些因素主要是：性別，品種，生理狀況，體質差別，以及“緊迫”等等。一般多發生於 35 ~ 50 週齡的成年雞，肉用種雞比白來亨雞 ( Leghorn ) 更容易發生感染，雄性雞比雌性雞表現出更輕的症狀，並且陽性抗體出現的時間要稍微晚一些。緊迫 ( stress ) 狀況或協同感染，後者如黴漿菌 ( Mycoplasma ) 感染、雞霍亂 ( chicken-cholera )、雞傳染性鼻炎 ( infectious coryza ) 等，都會促使疾病的發生。

到現在為止，雞大肝脾病只能感染家雞，其它禽類未必都能成為“自然宿主”。有許多證據表明，珍珠雞 ( guinea fowl )、鴨及其它水禽、鸚鵡、烏鴨、麻雀等等，根據血清學的種種研究，都沒發現雞大肝脾病因子 A 抗原的陽性抗體。至於火雞 ( turkey )，也只是在雞大肝脾病的雞肝病材接種“幼火雞”後，於 2 ~ 3 週之內瓊脂擴散試驗法可檢測到抗體，其它一律成年火雞或幼火雞也不是雞大肝脾病因子感染對象。

雞隻患了雞大肝脾病之後，一般情況可以分為“肉眼觀察”和／或“組織學變化”；即使是肉眼觀察 ( 特別是在疾病流行的過程當中 )，也足可證實雞隻是患了這種病。

1.良好的體況：病雞或死亡的雞隻中，體況往往是良好的，嗉囊常空虛，內臟和皮下脂肪呈黃疸色，肝臟和脾臟常行腫大 ( 特別是脾臟 )，呈“斑駁”狀 ( 一種顏色中摻有別種顏色，處於花花搭搭的模樣 )。

2.脾臟的重量：脾臟的“正常”重量為 2 ~ 3 克，脾與體重之比 0.5 ~ 0.8 克／公斤；而雞大肝脾病時，常為脾臟正常大小的 2 ~ 3 倍，重量往往達到 4 ~ 10 克或更多，脾與體重之比亦常達 1.1 ~ 3.0 克／公斤。

3.脾臟的切面：在脾的切面顯示有：紅髓 ( red pulp ) 中分佈著大量小的白色病灶；然而在疾病後期，切面可見大的粉紅色病灶，常呈蒼白色，有些雞隻的脾臟之重量可達 22 克以上。

4.卵巢的改變：卵巢往往退化，在大的蒼白色鬆弛的濾泡中常常出現血塊，在腹腔當中有時有游離卵黃的腹膜炎 ( peritonitis )；特別是病程後期，卵巢及輸卵管完全退化，或有數個濃縮的異常卵子附在不活躍的卵巢上。

5.內臟的出血：在十二指腸黏膜表面上，可見出血點；嚴重充血和水腫的肺臟和腎臟上，有時亦可見有瘀斑狀出血。

最具特徵的肝臟和脾臟組織病理學的變化，大致上可以分為以下六個階段。

1.淋巴增殖期：早在症狀出現前兩週左右，脾臟輕微腫大 ( 1.1 ~ 1.7 克／公斤 ) 時全身淋巴細胞即增生，肝及脾尤為明顯；脾表現為周邊橢圓體“成淋巴細胞”(lymphocytoblast ) 區增大，和動脈周圍“小淋巴細胞”( small lymphocyte ) 的增多，但濾泡 ( foilliculus ) 數目增加不明顯；肝臟亦表現為淋巴樣組織 ( lymphoid tissue ) 明顯增多。

2.固縮 ( pyknosis ) 破壞期：此時山現臨床症狀，淋巴樣組織內發生細胞核固縮 ( karyophknosis )，最初在脾濾泡和小動脈周圍的小淋巴細胞發生，以後擴展至脾白髓 ( White pulp ) 的所有區域，甚或紅髓 ( red pulp )；肝臟的血管周圍亦可見到核固縮。

3.巨噬細胞反應期：固縮破壞期後隨即進入巨噬細胞 ( macrophagocyte ) 反應期，有的時候亦可為多形核白血球 ( polymorphonuclear lekocyte ) 反應，受侵害的部位出現不少的碎片和死亡的吞噬細胞；在淋巴樣細胞間有嗜曙紅的 ( eosinophilic ) 巨噬細胞碎片及融合成片的壞死組織。

4.病後反應期：此時間內核固縮固然很少見到，但脾臟的巨噬細胞反應仍很明顯，腫大的脾出現大量的大的網狀內皮細胞 ( reticuloendothelial cell ) 區、不同程度的纖維變性 ( fibrosis )、殘存的壞死及不定形的病灶。

5.血液學之變化：血液學基本上反映了脾臟變化的特點，淋巴增殖期出現淋巴球增多；核固縮破壞期出現紅血球的固縮，而白血球則少見；巨噬細胞反應期和病後反應期有不同的核左移 ( shift to left )，有時出現大量的單核細胞增多症 ( mononucleosis，不超過 75% )；如果疾病早期出現巨大的反應性血小板 ( reactive thrombocytes )，則疾病後期必然表現為貧血。

6.疾病恢復期：免於死亡的雞隻，常常在臨床症狀出現之後，大約經過三到四週進入恢復期，此時脾臟大小基本恢復正常；在組織病理學上，除周邊橢圓體 ( ellipsoid ) 成淋巴細胞區有不同程度增大外，偶爾亦有殘存的小壞死灶、不同程度的纖維變性、以及肝的膽管增生等；脾臟在一段時間內雖然還維持衰竭狀態，但仍有淋巴細胞的生成等。

雞大肝脾病一般來說是一種慢性感染，潛伏期常需數月。性成熟前任何齡的母雞均可感染，但不發病。在肝臟、脾臟或血清中，雞大肝脾病抗原可能至少持續六週。因此，不論雞群是在一日齡或其後的任何時間感染，也不論是否存在雞大肝脾病循環 A 抗原或瓊脂擴散陽性抗體，往往在性成熟後的數週內發病。

在一個高度易感性的雞群裡，疾病在一至兩週內很快擴展至全群，雞群出現突然而又迅速產蛋量下降，這一時間要持續三至四週，隨後再經過幾個星期 ( 一般為三週左右 ) 又恢復到接近正常的水平 ( 在疾病後期常常可以見到“小雞蛋”，這項示著雞群產蛋量的水平即將宣告結束 )。若在“產蛋早期”發生雞大肝脾病。則雞群的產蛋高峰往往不夠明顯。母雞每天產蛋量的下降，一般來說其幅度大約在 5 ~ 20%。

在產蛋量下降明顯的同時，感染雞大肝脾病的商業性種雞群中，開始出現血清抗體由陰性轉為陽性；一般在最初產蛋量下降的兩到四週內，雞群中 70 ~ 100% 個體出現抗體。在爆發性的雞大肝脾病時，一般於組織學變化出現三週後，肉用種雞可以檢測到抗體。當用雞大肝脾病的脾臟、肝臟或血沉棕黃層 ( buffy coat ) 靜脈內接種產蛋的肉用種雞時，20% 左右個體在接種 13 天後出現抗體，20 天後 90 ~ 100% 出現抗體；接種後第十五天左右可從雞的肝、脾組織中檢測到雞大肝脾病抗原，20 天前後可以從 70% 個體檢測到抗原；與牠們養在一起的雞群，則要較遲一些出現血清陽性抗體，接種 30 天後只有 20% 個體出現陽轉、40 天後全雞群出現陽轉。這一點經營商業用肉用種雞群的人不可不知。

臨床和試驗資料表明，成年的肉用產蛋雞感染雞大肝脾病後，對本病“再感染”產生免疫力，一般說來是永久的，而且大多數雞群瓊脂擴散試驗陽性。雖然雞大肝脾病對“孵化率”有暫時性影響，但沒有明顯的蛋殼畸形。在一些雞群中可見到雞隻死亡率增加，隨著最初產蛋量的下降死亡開始升高，至產蛋量下降到最低水平時即達最大限度，然後逐漸恢復到正常。死亡率變化幅度較大，平均起來大致為 1%。

雞大肝脾病多在夏、秋季多發，以產蛋的肉用種雞最易感染，根據肝臟和脾臟腫大等特徵 ( 呈斑駁狀 ) 並結合著流行病學之特點，初步診斷並不困難；但是，需要進一步些“確診”( 特別是第一例 ) 那就不得不靠實驗室的協助。

用免疫瓊脂擴散試驗法來檢測抗體，一直被成功地用於商業性雞群的雞大肝脾病；在常規監測的計劃中，一般每隔四週抽檢一個雞群的 10 ~ 20 份血樣就可以了。瓊脂擴散試驗法雖然簡便易行，但有時亦可出現“假陽性”反應；糾正的方法是多做幾次試驗，並以正常肝組織抗原作為對照。又據 Payne 等報告稱，他已研究出“鋛聯免疫吸附測定法”( Enzymelinked immunosorbent assay )，用此法亦能克服假陽性，不過與瓊脂擴散試驗法比起來稍微費事些。( Payne , C.J. et al : ELISA testing of U.S.breeders and layers for big liver and spleen disease. In : Proceedings 40th Western Poultry Disease. Conference. Acapulco. 1991. )

雞大肝脾病的抗原常存在於脾、肝和血清中，可用瓊脂擴散試驗或鋛免疫測定加以檢測，亦可用免疫螢光試驗 ( Immunofluorescence test ) 來檢測組織切片、塗片和細胞培養物中的抗原，從而對雞大肝脾病感染作出診斷。病原的分離依賴於動物接種，在疾病的急性期採集感染雞的脾、肝或血沉中的“棕黃層”，接種易感雞胚或一日齡雛雞，在七日齡時便可在其血清或組織中檢測到雞大肝脾病 A 抗原。倘若接種到易感的成年雞，不僅可以引起產蛋量下降，血清中可檢測到雞大肝脾病的陽性抗體，而且在剖檢時脾臟腫大，組織中更可檢測到 A 抗原等。

產蛋量下降是一個養雞業最常遇到的問題，一些傳染病如減蛋症候群 ( Egg drop syndrome，亦稱產蛋下降症候群 )、傳染性支氣管炎 ( Infectious bronchitis )、傳染性喉氣管炎 ( Infectious laryngotracheitis )、新城疫 ( Newcastle disease )、環境緊迫 ( Environmental stress )、飼養管理等因素均可引起。倘若一個雞群出現產蛋量下降，且伴隨著雞大肝脾病抗體出現，剖檢肝臟或脾臟腫大並呈斑駁狀，具有典型的組織學變化，則可確診為雞大肝脾病。

儘管雞大肝脾病因子的自然宿主及傳播方式還不十分清楚，但首先是進行嚴格的隔離、嚴格杜絕傳染源的侵入、依靠嚴格的檢疫，乃是最重要的問題。雞場採購雞隻時，從抗體陰性的種雞群引種，並定期進行監測；最好是採用“全進全出”的辦法，一旦雞隻出售後，一定要進行嚴格的消毒。

雞大肝脾病尚無疫苗和特效療法。曾用感染組織製成滅活油乳劑疫苗，進行肉用種雞的實驗，結果用瓊脂擴散試驗法並沒有檢測到抗體。使用某些抗生素，在控制雞隻的死亡率有一定的作用，但主要是為了防止繼發性細菌感染，對病毒卻沒有什麼用途。

大量的事實證明，如果增加額外的飼料，將會有助於雞大肝脾病的雞群恢復產蛋水平。良好的衛生措施，有助於防止雞大肝脾病的擴散。本病的發病季節或許與媒介昆蟲有關，因此消滅有害昆蟲也是很重要的一個環節。在某些雞場，經過採取嚴格的檢疫措施和有效的衛生環境，已成功地消滅了雞大肝脾病。

雞大肝脾病的病原雖尚未查清，但基本上是由一種病毒引起的。由澳大利亞開始，目前已有許多國家 ( 如美國、英國、紐西蘭等 ) 都報告了這疾病，而且中國大陸業已查到本病的陽性抗體。雞大肝脾病的病理變化，主要為脾臟和肝臟腫大，並呈斑駁狀；加之產蛋量有明顯下降和一定的死亡率。雞大肝脾病沒有合適疫苗，亦無特殊的治療方法，只有依靠嚴格的檢疫措施、嚴格杜絕傳染源、或發病後進行嚴格的隔離，以使之雞大肝脾病無法發生或少發生。